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吖啶橙(Acridine Orange，AO)是一种荧光色素，激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。

在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

1. 吖啶橙单染
   
   1. 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调节细胞浓度约为10⁶/mL；
      
   2. 吸取95μL的细胞悬液和5μL的吖啶橙染液，轻轻混匀；
      
   3. 室温避光染色15min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
      
      1. 正常细胞——细胞被均匀染成黄绿色荧光；
         
      2. 凋亡细胞——染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒。
   4. 荧光显微镜，激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长515nm观察，计数、拍照。
2. 与EB双染
   
   1. 收集细胞，1×Buffer A洗一次，加适量的1×Buffer A重悬，调整细胞浓度约为10⁶/mL；
      
   2. 吸取90μL细胞悬液，加入EB染液和吖啶橙染液各5μL，轻轻混匀；
      
   3. 滴加于载玻片上，室温避光染色15min后，加盖玻片；
      
      1. 正常细胞——细胞被均匀染成绿色荧光；坏死细胞——细胞桔黄色荧光；
         
      2. 凋亡细胞——染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。
   4. 荧光显微镜，滤光片515nm观察，计数、拍照。
      
   5. 计算细胞凋亡率和死亡率。